實驗原理:
酪酰胺信號放大技術(Tyramide Signal Amplification, TSA)主要是利用酪胺的過氧化物酶反應。酪胺非活性熒光素底物在HRP和過氧化氫的作用下,會被激活產生活化熒光底物,同時形成共價鍵結合位點,共價結合在蛋白抗原表面或附近的酪氨酸殘基上,抗原和抗體的結合部位就會有大量的酪胺熒光素沉積,使抗原位點處的熒光信號增強。
酪胺熒光素底物-抗原酪氨酸共價穩定結合,故TSA信號不會受微波影響,可用熱修復法清除第一輪與抗原非共價結合的抗體復合物,并能在抗體去除后保留與抗原相關的熒光信號。然后,再用第二種一抗進行第二輪孵育,同時更換另一種酪胺熒光素底物,多次循環反復,不同的酪胺熒光素進行標記就可實現多重免疫組化染色。
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TSA原理示意圖
實驗方法:
實驗前準備:
1、PBS緩沖液、枸櫞酸鈉抗原修復液(或其他修復液)及3%?H2O2溶液;
2、用于IHC-P的多個靶標一抗;
3、mIHC試劑盒(多聚HRP二抗、TSA熒光素、TSA增強劑)
操作步驟:
石蠟切片脫蠟至水→抗原熱修復→阻斷內源性過氧化物酶→血清封閉→
第一個一抗孵育→對應HRP二抗孵育→添加TSA染色工作液1→微波加熱處理→
第二個一抗孵育→對應HRP二抗孵育→添加TSA染色工作液2→微波加熱處理→
第三個一抗孵育→對應HRP二抗孵育→添加TSA染色工作液3→微波加熱處理→
……
以此循環N次→細胞核復染DAPI→封片及檢測
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多重免疫組化原理示意圖
TSA技術優勢:
1.?提高信號放大倍數,顯著擴增抗原相關熒光信號;
2.?可檢測低蛋白豐度的靶標,提高實驗體系靈敏度;
3.?可微波去除一抗/二抗及非特異性染色;
4.?降低一抗使用量,節約一抗成本;
5.?針對每張組織切片可收集到更多的數據,實現一張切片多達6種靶標的共表達;
6.?適合任何經IHC-P驗證的抗體,同一樣本中的靶標都可以選用高特異性的正能生物病理級抗體;
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7.?可在同一樣本中使用同一種屬來源的多種一抗進行多標記識別,例如都選用兔單克隆抗體,避免了交叉干擾,同時解決了一抗二抗種屬匹配限制問題。
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產品信息:
我司開發的多重免疫組化試劑盒,具體TSA熒光染料參考如下:TSA-480,TSA-520,TSA-570,TSA-620,TSA-670,TSA-690,TSA-780。
試劑盒中的熒光染料可單獨或配合使用,可以實現雙標、三標以及更多重熒光放大/多重同源抗體熒光標記等功能,極大滿足了淋巴細胞檢測、腫瘤微環境等各領域實驗需求。
產品貨號:18003
產品名稱:Goat Anti-Mouse/Rabbit Multiplex IHC Detection Kit (Triple)
產品規格:50T/100T
結果展示:Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded mouse hippocampus tumor using DCX (Green), GFAP (Red) and NeuN (Pink) antibodies.
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